紫色甘薯中的高酰化花青素减轻高尿酸血症小 [复制链接]

原名：HighlyAcylatedAnthocyaninsfromPurpleSweetPotato(IpomoeabatatasL.)AlleviateHyperuricemiaandKidneyInflammationinHyperuricemicMiceossibleAttenuationEffectsonAllopurinol

译名：紫色甘薯中的高酰化花青素减轻高尿酸血症小鼠的高尿酸血症和肾脏炎症：对别嘌呤醇的可能抑制作用

版面费：0影响因子：5.

DOI号：10./acs.jafc.9b

一、研究背景

在中国，到年，高尿酸血症患者数量已超过1.8亿，成为仅次于糖尿病的第二大代谢性疾病。此外，高尿酸血症被认为与慢性肾脏疾病的发展密切相关。一旦催化活性增强的*嘌呤氧化酶（XO）产生超出肾脏排泄能力的过量尿酸（UA），体外无法排泄的尿酸将在肾脏内沉积结晶，直接导致肾损伤。长期高尿酸血症可导致人体关节内和关节周围尿酸晶体沉积，是导致广泛的代谢性疾病之一。高尿酸血症的发生和发展与嘌呤代谢紊乱和血清尿酸浓度持续升高有关。在过去的几十年里，全世界越来越多的人被发现患有高尿酸血症和痛风。

别嘌呤醇是治疗高尿酸血症的一线药物。然而，在接受别嘌呤醇治疗的患者中，经常报告严重的药物不良反应。本研究旨在评估紫色甘薯高度酰化花色苷（HAA-PSP）对用别嘌呤醇治疗的高尿酸血症小鼠的高尿酸血症和肾脏炎症的可能抑制作用。与别嘌呤醇单独使用相比，HAA-PSP和别嘌呤醇联用不仅可以降低高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平，而且可以减轻肾脏损伤，血清生物标志物水平和组织病理学检查都表明了这一点。通过抑制肾脏中典型细胞因子的蛋白表达，炎症反应得到部分缓解。我们的发现为HAA-PSP与别嘌呤醇对高尿酸血症和炎症相关综合征的补充治疗潜力提供了新的证据。此外，本研究为评估富含花青素的食品在健康方面的潜力提供了理论基础。

二、研究结果

高尿酸小鼠模型的建立

在正式实验开始时，将小鼠随机分为六组，包括正常对照组（NC组）、高尿酸血症组（HUA组）、别嘌呤醇组（AP组）、HAA-PSP组（HAA组）、HAA-PSP低别嘌呤醇组（HAA-LAP组）HAA-PSP高别嘌呤醇组（HAA-HAP组）。为了诱发高尿酸血症，除NC组外的五组小鼠口服mgkg?1体重?1份氧酸钾溶液（分散在0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）-Na中），每天一次，连续7天。NC组用溶剂载体处理。

血液和组织器官样本的采集

在第7天最后一次给药后1小时处死小鼠。收集全血样本，凝固1小时，并在g下离心10分钟。收集血清上清液并储存在?20°C，直到分析。肾和肝组织在冰盘上迅速而仔细地分离。用生理盐水清洗后，迅速称重。两个肾组织样本中的一个立即浸入4%磷酸盐缓冲福尔马林（pH值7.1）中进行组织病理学分析，而另一个则快速储存在室温下?80°C用于蛋白质印迹分析。

器官指数和血清生化指标的测定

根据公式计算新鲜体重基础上的肝脏和肾脏指数，根据制造商的说明，使用市售试剂盒测定血清中UA、BUN、Cr、T-SOD活性和MDA水平。每项分析均一式三份进行。

蛋白质印迹分析

电泳塑料由5%浓度凝胶和12%分离凝胶组成。在凝胶上分别分离等量（40μg）的不同样品，直到目标蛋白完全分离。然后将蛋白质电泳转移到聚偏二氟乙烯膜上。

在含有5%脱脂奶粉的TBST（含0.1%吐温-20的Tris缓冲盐水）中封闭膜并培养2小时。然后，用在TBST中稀释的特异性抗体分别处理膜，包括GAPDH（1:）、TNF-α（1:）、TGF-β1（1:）、IL6（1:）、IL-1β（1:）、ICAM-1（1:）、COX-2（1:），和NF-κBp65（1:）抗体。关于主要抗体的信息见表2。

三、研究结果

HAA-PSP、别嘌呤醇及其组合对高尿酸血症小鼠的降尿酸作用及其对小鼠肝和肾重量的影响

图三HAA-PSP、别嘌呤醇及其组合对高尿酸血症小鼠的降低作用

图四HAA-PSP、别嘌呤醇及其组合对高尿酸血症小鼠体、肝和肾重量的影响

血清指标的测定

图五HAA-PSP、别嘌呤醇及其组合对高尿酸血症小鼠血清（A）Cr水平、（B）BUN水平、（C）T-SOD活性和（D）MDA水平的影响

CR肌酐，是肌肉里磷酸肌酐的代谢产物，机体通常以恒定的速率产生BUN，肾功能BUN是尿素氮的英文缩写，它是反应肾脏功能的一个指标T-SOD，是超氧化物歧化酶，是锌原和锌水平对血清生化指标的影响MDA膜脂过氧化产物的含量是反应细胞膜过氧化作用强弱的一个指标

组织病理学检查

图六别嘌呤醇及其组合对高尿酸血症小鼠肾脏组织病理学的影响：（A）正常对照组的肾脏切片；（B）高尿酸血症组肾切片；（C）肾脏切片2.5mgkg?1别嘌呤醇组；（D）肾脏切片25mgkg?HAA-PSP组1例；（E）肾脏切片25mgkg?1个HAA-PSP，含2.5mgkg?1别嘌呤醇组；（F）肾脏切片25mgkg?1台HAA-PSP

HAA-PSP通过抑制肾脏炎性细胞因子的影响

图七肾炎性细胞因子的蛋白水平

NF-κB活化对肾脏炎症的影响

图八三种相对肾蛋白水平

三、总结与启示

结论：在这项研究中，我们研究了HAA-PSP对用别嘌呤醇治疗的高尿酸钾诱导的高尿酸血症小鼠的高尿酸血症和肾脏炎症的可能抑制作用。25mgkg时HAA-PSP的组合和别嘌呤醇，2.5mgkg?与单独应用HAA-PSP或别嘌呤醇相比，组合显示出更好的降尿酸作用和对肾损伤的*性减轻作用。这两种成分的联合治疗不仅可以通过调节血清T-SOD活性和MDA水平来减轻氧化应激，还可以通过介导NF-κB途径下调典型细胞因子的蛋白表达，从而减少炎症细胞的浸润，减轻肾损伤。我们的结果为HAA-PSP与别嘌呤醇对高尿酸血症和炎症相关综合的潜在补充作用提供了新的证据。此外，本研究为评估富含花青素的食品的健康潜力提供了理论基础。收获：1.了解了如何提取、纯化紫甘薯高酰化花色苷，并对其11个花色苷的结构进行比较和鉴定。2.了解了HAA-PSP与别嘌呤醇的组合有着更好的降尿酸作用和对肾损伤的*性减轻作用。